Come
si procede
Sul
cestello rotante della ultracentrifuga si posizionano le provette
contenenti il materiale biologico, con la parte terminale delle
provette inclinata verso l'esterno. Durante la centrifugazione
i materiali più densi si depositeranno verso il fondo
delle provette, mentre in alto resteranno le frazioni più
leggere.
Da
un miscuglio come quello del materiale cellulare di solito si
separano due frazioni. Si chiama pellet il materiale
compatto che resta sul fondo e surnatante tutto ciò
che rimane in sospensione.
Se
si aumentano la velocità e il tempo di centrifugazione,
anche le particelle più leggere si accumuleranno sul
fondo.
Per
separare i componenti cellulari si procede allora per tappe
successive.
Ecco
un esempio:
- centrifugazione
per 10 minuti a 600 g: precipitano sul fondo i nuclei,
i citoscheletri e le
cellule eventualmente intere;
- centrifugazione
del surnatante per 10 minuti a 8500 g: sul fondo
rimangono mitocondri
e lisosomi;
- centrifugazione
del nuovo surnatante per 30 minuti a 100.000 g: restano
sul fondo le piccole vescicole;
- centrifugazione
del nuovo surnatante per 3 ore a 150.000 g:si riescono
a separare sul fondo i ribosomi.
La
centrifugazione in gradiente di saccarosio
