L’ibridazione di acidi nucleici

Quando una soluzione acquosa di DNA raggiunge la temperatura di ebollizione o viene esposta a un pH alcalino, la doppia elica si dissocia rapidamente nei due singoli filamenti, perché si rompono i legami idrogeno tra le basi appaiate.

Questo processo, noto come denaturazione del DNA, è reversibile. Il processo attraverso il quale si ricostituisce la doppia elica del DNA a partire da due filamenti singoli è detto reazione di ibridazione. Perché vi sia ibridazione, due filamenti devono presentare sequenze di nucleotidi complementari.

La proprietà del DNA di dissociare e riassociare i due filamenti della doppia elica, insieme alla possibilità di sintetizzare molecole di DNA "marcate", cioè in grado di emettere un segnale, è stata largamente sfruttata in biologia molecolare.

All’interno di una miscela di DNA si può infatti identificare un frammento che porta una sequenza nota facendolo ibridare a un filamento di DNA marcato che abbia la sequenza complementare.

L’ibridazione può anche avvenire tra due filamenti di RNA o tra DNA e RNA; l’ibrido RNA/RNA o RNA/DNA è molto stabile, più stabile dell’ibrido DNA/DNA.

L’ibridazione è una tecnica di fondamentale importanza per la ricerca e per le applicazioni biomediche e biotecnologiche. In particolare, per il clonaggio di geni a partire da librerie genomiche o di cDNA, l’ibridazione è indispensabile per identificare i geni all’interno della libreria.

Come si genera una molecola di DNA radioattiva?

L’ibridazione in situ

L’ibridazione a stringenza ridotta

Southern e Northern blotting